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小鼠H9型禽流感病毒(H9N2)ELISA檢測(cè)試劑盒
小鼠H9型禽流感病毒(H9N2)ELISA檢測(cè)試劑盒 價(jià)格:2400  元(人民幣) 產(chǎn)地:上海浦東新區(qū)
最少起訂量:1 發(fā)貨地:上海浦東新區(qū)
上架時(shí)間:2020-12-21 11:36:04 瀏覽量:429
上海蒂莎科技有限公司  
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所屬行業(yè):生物試劑 主要客戶:
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聯(lián)系方式

聯(lián)系人:李萱 (小姐) 手機(jī):17317625126
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詳細(xì)介紹

本試劑盒用于體外定性檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本小鼠H9型禽流感病毒(H9N2)。

有效期:6個(gè)月

保存條件:2-8℃

本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理

劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠H9型禽流感病毒(H9N2)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、陰性和陽性對(duì)照、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠H9型禽流感病毒(H9N2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度(OD 值),判定陰陽性。

樣本處理及要求

1.  血清將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mLPBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

需要而未提供的試劑和器材

1.  酶標(biāo)儀(450nm

2.  高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.  37℃恒溫箱

4.  蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

 

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

96

48

陰性對(duì)照

0.3mL

0.3mL

陽性對(duì)照

0.3mL

0.3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即120×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰性對(duì)照、陽性對(duì)照孔和樣本孔,陰性、陽新對(duì)照孔各加50μL對(duì)照品

3.  樣本孔待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

1. 陰性對(duì)照OD值:小于0.2。

2. 陽性對(duì)照OD值:大于0.8。

3. 陽性判斷(Cut-Off值):陰性對(duì)照OD+0.15,樣本OD值大于閾值,判定為陽性,反之,為陰性。

注意事項(xiàng)

1.  嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2.  洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3.  消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4.  底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5.  避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6.  在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7.  平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.  任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9.  不能使用過期產(chǎn)品。

10.  如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。


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